超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)的常見問題和解決方案

超聲波細(xì)胞破碎直接沉淀直接加入樣品1b緩沖液，加入5ul巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接加載，染色和脫色步驟如下：將膠水放入適量染色中在微波爐中液體1分鐘（以下）可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)囊宜崽砑?，并且可以在微波爐中用大量的水（自來水）代替染色溶液10分鐘。

超聲波系列的超聲細(xì)胞破碎器在表達(dá)重組蛋白后超聲破碎細(xì)胞，使用400w冰浴，破碎2s 1s，但在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量泡沫，影響破碎力量。 pbs和tris緩沖區(qū)都是這樣的。它沒有完全破碎，我感興趣的蛋白質(zhì)就在這些完整的細(xì)胞中。

1.由于未設(shè)置探頭位置，將生成氣泡。探頭必須靠近底部，大約1厘米（我通常距離底部0.5毫米）。功率會(huì)因儀器而異，但您可以觀察液位，波動(dòng)但不太強(qiáng)烈。

2.打破3S停止10S，打破二三十次看。

3.還要注意喇叭的位置。如果聲音錯(cuò)誤，應(yīng)及時(shí)調(diào)整。另外，從細(xì)菌濃度的觀點(diǎn)出發(fā)可以考慮。壓碎時(shí)盡量增加體積，強(qiáng)度*不應(yīng)超過60％。

4.嘗試8s 8s。對(duì)于某些細(xì)菌蛋白質(zhì)，您的方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性產(chǎn)生氣泡。 暫停時(shí)間稍長(zhǎng)。這在包涵體的形式中更為常見。

鏈霉菌（放線菌）超聲處理（超聲細(xì)胞破破壞）的條件是什么？

預(yù)處理通常是配置成一定濃度的細(xì)菌懸浮液。

使用超聲波破壞時(shí)使用的具體條件是：

（1）取約的24h培養(yǎng)液，以5000r / min離心5min，收集細(xì)菌。

（2）用pH7.5的Na2HPO-NaH2PO緩沖液洗滌3次，然后用緩沖液制備1：3的細(xì)菌懸浮液。放在40

mL大型塑料試管。

（3）（超聲波破碎機(jī)）將大塑料試管放入冰浴中，用超聲波破碎（功率200W，1/2“探頭，壓碎30s，間歇30S）。

（4）將破碎的液體以12,000r / min的速度高速離心30分鐘，收集細(xì)胞碎片和上清液。