大腸桿菌表達(dá)外源蛋白，超聲處理后懸浮于含1％triton-X-100的PBS中，超聲效果更佳，1％triton-X-100效果依然明顯。有些細(xì)菌也有效。

細(xì)菌沉淀直接加入樣品1b緩沖液，加入5ul巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接加載，染色和脫色步驟如下：將膠水放入適量的微波爐中染色液中1min ，大量更換染色溶液。水可以在微波爐中煮10分鐘。

表達(dá)重組蛋白后，用超聲波破碎細(xì)胞，使用400w冰浴，破碎2s 1s，但在短時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生大量泡沫，影響破壞力。超聲波細(xì)胞破碎器。 pbs和tris緩沖區(qū)都是這樣的。它不完全破碎，目標(biāo)蛋白質(zhì)存在于這些未破碎的細(xì)胞中。

1.由于未設(shè)置探頭位置，將生成氣泡。探頭必須靠近底部，大約25px。功率會(huì)根據(jù)超聲波電池的破損而變化，但您可以觀察液位，有波動(dòng)但不會(huì)太強(qiáng)烈。

2，打破3S停10S，打破二三十次看。

3，喇叭的位置也應(yīng)注意，如果聲音錯(cuò)誤，應(yīng)及時(shí)調(diào)整。另外，從細(xì)菌濃度的觀點(diǎn)出發(fā)可以考慮。粉碎時(shí)盡量增加體積，強(qiáng)度不應(yīng)超過60％。

4，試著停止8s持續(xù)8s，對(duì)于一些細(xì)菌蛋白質(zhì)，你的方法很難散熱，導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性產(chǎn)生氣泡，最好的暫停時(shí)間稍長(zhǎng)，這種情況更常見的是包涵體蛋白質(zhì)的形式。

鏈霉菌超聲處理的條件是什么？

  1.將細(xì)菌24小時(shí)培養(yǎng)液以5000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘以收集細(xì)胞。

  2.用pH7.5的Na2HPO-NaH2PO緩沖液洗滌3次，然后將細(xì)菌與緩沖液混合成1：3的細(xì)菌懸浮液。置于40 mL大塑料試管中

  3.將大塑料試管放入冰浴中，用超聲波破碎（功率200 W，1/2“探頭，壓碎30 s，間歇30 S）

  4.將破碎的液體以12000r / min的速度高速離心30分鐘以收集細(xì)胞碎片和上清液。

超聲波滅菌過程基本上與上述相同，即洗滌池也可以用預(yù)先冷卻的生理鹽水或pH8 Tris-HCl洗滌一次。另外，超聲劑量隨樣品和細(xì)菌的量而變化很大。超聲波細(xì)胞破碎機(jī)的功率可以達(dá)到400-600w，超過5s，停止5s，冰浴，并添加終濃度為1mM的PMSF。為了確定超聲的適當(dāng)強(qiáng)度和頻率，有必要隨時(shí)觀察細(xì)胞是否完全破裂。放線菌屬于革蘭氏陽性細(xì)菌的克隆組，在原核系統(tǒng)的系統(tǒng)發(fā)育樹上具有高摩爾百分比。雖然它具有原核生物獨(dú)有的分子和生物學(xué)特性，但不同組中細(xì)胞壁的化學(xué)成分發(fā)生巨大變化

在大腸桿菌超聲檢查中，方法為400W，超5停5，效果好，但用于鏈霉菌，似乎沒有效果。是否由于細(xì)胞壁組成的差異，因?yàn)榇竽c桿菌是革蘭氏陰性細(xì)菌。

另一項(xiàng)顯微鏡檢查是為了測(cè)試破碎效果，但細(xì)胞破壞程度與我需要的酶攝取之間是否存在直接關(guān)系？長(zhǎng)休息時(shí)間也會(huì)影響酶的活性。所以我想問一下anaisai同志，你提供的“200 W，1/2”探頭，30 s斷裂，間歇性30 S“條件似乎用于打破鏈霉菌孢子，但也可用于發(fā)酵后離心泥？如果是這樣，你休息的總時(shí)間是多少？

如果您需要細(xì)胞內(nèi)酶，細(xì)胞破壞程度與所需的酶獲取之間基本上存在比例關(guān)系。長(zhǎng)休息時(shí)間確實(shí)會(huì)影響酶的活性。這需要判斷Zui良好的休息時(shí)間和酶活性。 Zui的直接方法是首先繪制相關(guān)曲線。

在我的實(shí)驗(yàn)中，破碎的細(xì)菌是棒狀細(xì)菌，破碎時(shí)間控制在約30分鐘，酶活性更好。

如果是基質(zhì)菌絲，最好考慮使用溶菌酶。